值孔徑的透鏡。此后不久,這項技術在醫學和生物學中得到應用。
1979年,凱斯特(Koest曰)設計了一種徠卡共聚焦顯微鏡,為此他獲得了美國。198l年,維納恩茲•范•雷桑持(W加aed銘vanResnmt)*次成功地演示了用熒光探針標記的生物材料的光學橫斷面,它標記著所有的關鍵技術已經成熟。同年,范德•威歐瑞特(vaa』erVoon)全面地描述徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡。他認為一套高質量的重視日常激光掃描共聚焦顯微鏡必須包括:標準消像差和色差的光學透鏡、高靈敏度的探測器、產生特定波長的功率不太小的激光器、高速度大容量的微機系統和掃描控制裝置。
早期的徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡采用狹縫掃描,它的待點是掃捆速度較快,適合實時觀察動態標本。但是內于顯微鏡的物鏡存在著軸外傷差,并且用狹縫掃描時在平行狹縫e1光軸平面亡沒有共聚焦原理,所以得到的共聚焦圖像的清晰度和質量都受到影響。另外,由于一般徠卡顯微鏡存在著紫外色差、所以不可以用紫外光做為熒光激發的光源,但是由于
它的掃描速度快,結構簡單,價格便宜,所以還是有一定的使用價值。
為了克服早期徠卡共聚焦顯微鏡的缺點,后來的采用臺階掃描技術提高成像質量。它的原理是掃描時光欄(用孔光欄代替狹纏)不動,靠移動工作臺讓物體一點一點被掃描,這樣成驚光束永遠是軸上的、沒有軸外傷差。另外有些儀器上還加了滬紫外色差的切換裝此,這種儀器的圖像質量相功能比以前有人的改進。隨之而來的缺陷也很嚴重:婦報時必須把標本固定死,以于使它的掃描速度比以前慢得多.所以方法實時地觀察活標本。
在使用較多的是光束掃描器,即驅動激光束扛描標本。它具安足夠伙的速度,可滿足共聚焦系統的要求。光束列描器包括:單光束、多)t束、狹縫扣擬器。單光束們描器性能.狹繼掏描器雖具有產生圖像的zui高速度.但是與單點掃描器帕比,信噪比較低,這
是由J;從散焦區來的沒肘光不能被有效的檔住.另外在其分辨率本領廠有內部的不平衡性。多光束掃描器由電動馬達帶動N1pk‘’v盤旋轉而完成。
從發展過程來看.成像質量與掃描速度始終是相互矛盾的。各廠家在此方面曾想盡辦法努力解決,比如MerEd,an公司推出成鐐質垃較高的U比ma如激光掃描共聚焦顯微鏡祁掃描速度zui快的In,Ight型激光掃描共聚焦顯微鏡,而Nikon公向則利用自家光學設計的優勢.研制出產品“水鏡”來代替以柞的物鏡,取得較好的結果。公司*家推出共聚焦物鏡CN.ANAP()CHIMAT40x/1.2w*zui近又推出C—PI‘ANAP()63X/1.2w水鏡,該水鏡有一調節環,可修正閻水浸活休的不同深度所帶來的球差,其紫外通過率南,大大提高了成像質量。zeM公司也是世界r1*家奉公司白行設計的“體視激光掃描共聚焦顯微鏡,使系統性能達到高度的協調同一。N。—Red公司傘產的激光扣描共聚焦顯微鏡,出于其產品價廉物美.目前在世界上占有率較高。
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