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體視顯微鏡-蓋玻片的影響

更新時間:2011-12-22   點擊次數:4475次

體視顯微鏡-蓋玻片的影響

對于數值孔徑在0.4以上的物鏡來說蓋玻片被包括在光學矯正之內,它成為像的形成中一個*的部分,因此我們在介紹物鏡時必須討論蓋玻片的影響。

蓋玻片的基本功能是對標本起保護作用,但是它的存在卻影響到來自標本光線的光路。在使用于系物鏡時,來自標本的光線在玻璃空氣界面上被折射。從圖3.6中可以看出,光線與光軸之間的角度愈大,這種影響也就愈明顯,這種現象產生了一種很多方面與透鏡的球面差(地說是負球面差)相似的效應。除了蓋玻片外,在蓋玻片下面的封藏劑(一般折射串接近于玻璃)也起一定的作用,但由于達層封建劑一般很薄,因此在引起這種光學現象中蓋較片起著遠為重要的作用。

從圖3.6中還可以看出,蓋玻片肋厚度會彤響這種效應,因此只有對于一定的蓋破片厚度,物鏡的矯正才是可能的。如果益玻片太薄或太厚,都會由于這種負球面差而使像模糊或降低像的質量。益玻片的據準厚度在上統(tǒng)一規(guī)定為0.17mm,因此,現在所有的物鑰都是根據這個厚度的矯正而設計的。實際上我們所使用的孟玻片與0.17mm的標準值總是有相當的偏差,往往變動在0.145--0.185mm之間。而不同孔徑的物鏡,對于蓋玻片厚度的要求有不同的可允許偏差范圍,曲田的孔徑愈大,這種可允許的偏差范圍就短小(表5)。因此,當使用數值孔徑低于o.4購物鏡時,蓋玻片本身的影響是無足輕重的;當使用數值孔徑為0.5或0.6的物鏡時,對于一般在0.145--0.185mm之間變動的益玻片厚度仍然是影響不大的;當使用較高數值孔徑(o.75一o.95)的干系物鏡時,在上述范圍內變動的蓋玻片厚度會對仍的質量產生很大影響,例如在使用數值孔徑為0.90的物鏡時,蓋玻片厚度的0.01—0.02mm的差異就臺明顯地影響像的質量。

體視顯微鏡由于在標本和益玻片之間還有一層一定厚度的封蘸劑,這實際上增加了益玻片的厚度,因此所使用的蓋玻片厚度必須薄于o.17mm,選擇厚度在o.15一o.16mm之間的蓋玻片。此外,在封藏切片時應注意不要把樹膠滴得太多,也不宜使用過于粘稠的樹膠,以免使樹膠層太厚而降低像的質量。必要時還可以在封藏后立即用小重物在益玻片上適當加壓,以排出過量的樹膠。

對于在生物顯微技術中廣泛使用的5—7μm厚的石蠟切片,根據計算zui合適的益玻片厚度為0.155mm。

另一方面當用顯微鏡觀察沒有蓋玻片的標本時,由于物鏡球面差的過度矯正,具有較大孔徑的物鏡格會形成一個模糊不清的像,為此,現在已制造出用于不帶益玻片標本觀察用的特殊物鏡,在這種物鏡上標有“O”字樣。

如上所述,體視顯微鏡由于蓋破片的厚度很難都達到o.17mm的值,往往在o.145一o.185mm之間變動,因此現在已設計制造出數值孔徑大于o.75的具有校正環(huán)的干系物鏡(圖3.7)。這種具矯正環(huán)的物鏡對于在o.12一o.22mm范圍之內的益玻片厚度誤差部可以進行校正。在這種物銳簡上裝有環(huán)狀調節(jié)裝置,通過調節(jié)物鏡中各組透鏡之間的距離,從而校正由蓋玻片厚度誤差所產生的影響。在這種物鑷的校正環(huán)上具有精細的刻度,對于已知的蓋玻片厚度,可以預先在刻度尺上對猴相應的刻度。熟練的觀察者,不用測定蓋玻片厚度,只旋轉校正環(huán)就能調節(jié)蓋玻片厚度混差所引起的不良影響。如果在物鏡上沒有校正裝置,可伸長的鏡簡(圖1.3)可以在一定程度上用于蓋玻片厚度的校正:當蓋玻片太厚時可以縮短鏡筒:當蓋玻片太薄時可以伸長鏡筒。

體視顯微鏡物鏡

體視顯微鏡只有使用高倍干系物鏡時,對蓋玻片厚度的校正才是重要的。在使用油浸物鏡時,由于標本和物鏡之間的蓋玻片和浸油具有相同的折射串,蓋玻片的影響在像的形成中實際上是不起作用的。由于油涇物鏡*排除了蓋玻片的影響,并且能適當地增大您的反差,其效果超過了相同質量的于系物鏡,因此在zui近幾年,人們對數值孔徑為o.8—1.2、放大倍數在高倍干系物鏡范圍內(40一70×)的油浸物鏡愈來愈感興趣。

 

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